Southern blotti analüüs

Kirjeldav

Näitaja kohta

Southern blotti analüüs on laboratoorne meetod DNA fragmentide tuvastamiseks ja analüüsimiseks. Seda kasutatakse laialdaselt geneetiliste muutuste, nagu deletsioonide või inseratsioonide, ning geeniekspressiooni uurimiseks.

Mis on Southern blotti analüüs?

Funktsioon

DNA fragmendi tuvastamine spetsiifilise probe abil
Geenikaardistamine ja restriktsioonifragmentide pikkuse polümorfismi (RFLP) analüüs
Geneetiliste haiguste (nt Huntingtoni tõbi, tsüstilise fibroosi) diagnostika

Päritolu

Meetodi arendas Edwin Southern 1975. aastal
Põhineb DNA fragmentide eraldamisel gel-elektroforeesi abil ja ülekandmisel membraanile
Klassikaline meetod molekulaargeneetikas, mida kasutatakse koos uuemate meetoditega (nt PCR)

Protseduur: kuidas analüüs tehakse?

Protseduur

DNA eraldamine proovist (nt verest või kudedest)
DNA lõikamine spetsiifiliste ensüümide (restriktsioonendonukleaaside) abil
Fragmentide eraldamine agaroose gel-elektroforeesi abil suuruse järgi
DNA ülekandmine (blottimine) tahkele membraanile (nt nailonile)
Hübriidimine märgistatud DNA-prooviga (radioaktiivselt või fluorestsentsmärgistatud)
Autoraadiograafia või muud tuvastusmeetodid spetsiifiliste lainete visualiseerimiseks

Positiivne Southern blotti analüüsi tulemus

Mida see tähendab?

Spetsiifilise DNA fragmendi olemasolu proovis, mis kinnitab sihtgeeni või mutatsiooni olemasolu
Geneetilise haiguse kinnitus (nt fragiilse X sündroomi, sickle cell anemia)
Patogense organismi (nt viiruse) DNA tuvastamine infektsiooni korral
Geneetilise fingerprindi (DNA profiili) loomine kohtuekspertiisis

Indikatsioonid: millal seda analüüsi tehakse?

Peamised rakendusalad